一、實(shí)驗(yàn)名稱：

　　用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞

　　二、實(shí)驗(yàn)材料：

　　顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片，及其他細(xì)胞裝片。

　　三、實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座，把顯微鏡向著光放在實(shí)驗(yàn)臺上。

　　2、對光：轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔。

　　3、調(diào)節(jié)載物臺下的反光鏡，從目鏡往下看，能看見亮的光圈。

　　4、觀察：調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺上，用壓片夾夾住，標(biāo)本要正對通光孔的中央。

　　5、左眼向目鏡內(nèi)看，同時轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋等，直到看清切片上的細(xì)胞為止，最后整理器材。

　　四、使用注意事項(xiàng)：

　　1、取送顯微鏡時，應(yīng)右手握住鏡臂,左手托住鏡座，輕拿輕放。

　　2、鏡檢時，坐姿端正，一般用左眼觀察物象，用右眼看著實(shí)驗(yàn)報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。

　　3、切忌一面從目鏡進(jìn)行觀察，一面使鏡筒下降，這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。

　　4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。

　　5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒，移開鏡頭后再取出玻片標(biāo)本，以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。

　　五、實(shí)驗(yàn)原理：

　　利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。

　　六、創(chuàng)新點(diǎn)：

　　在實(shí)驗(yàn)過程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片，以供學(xué)生操作、觀察，增加了學(xué)生動手實(shí)驗(yàn)的時間，使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過程，從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。

微生物實(shí)驗(yàn)報告4

　　霉菌的培養(yǎng)與形態(tài)學(xué)觀察：實(shí)驗(yàn)一真菌培養(yǎng)基的配制與滅菌

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

　�。�1）了解培養(yǎng)基的配置原理和方法，掌握分離培養(yǎng)微生物的有關(guān)準(zhǔn)備工作。

　�。�2）掌握高壓滅菌方法及原理

　　實(shí)驗(yàn)原理：

　�。�1）培養(yǎng)基的制備原理：

　　培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。

　　從營養(yǎng)角度分析：

　　營養(yǎng)：碳源、氮源、能源、生長素、水分和無機(jī)鹽等；?適宜的酸堿度(pH值)和一定緩沖能力；?一定的氧化還原電位；?合適的滲透壓。

　　瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)，是應(yīng)用最廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反復(fù)融化，其凝固性降低。

　�。�2）濕熱滅菌原理－高壓蒸汽滅菌

　　在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫

　　度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。

　　實(shí)驗(yàn)材料與方法

　　配制培養(yǎng)基所需器材

　　實(shí)驗(yàn)設(shè)備：高壓蒸汽滅菌器。

　　實(shí)驗(yàn)器材：500ml三角燒瓶、藍(lán)蓋瓶、5ml刻度吸管、培養(yǎng)基、天平、砝碼、

　　稱量紙、藥勺、500ml、100ml量筒、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐、平皿、剪刀等。

　　培養(yǎng)基等集中放講臺前高壓桶內(nèi)，送到洗刷室統(tǒng)一高壓滅菌條件及注意事項(xiàng)

　　高壓滅菌條件：121.3℃，15min。含糖培養(yǎng)基113℃，15min。

　　倒平板電爐加熱滅菌好的培養(yǎng)基打開平皿包裝倒平板（10塊）注意事項(xiàng)：空氣環(huán)境無菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)）。

　　a.在酒精燈火焰處，傾斜打開瓶口。

　　b.瓶口要過火焰。

　　c.左手掀開平皿小口。

　　d.傾注滿皿底再多一點(diǎn)，約10ml（7cm直徑平皿）。

　　e.推放一邊要輕緩，不能晃起瓊脂掛壁，易在培養(yǎng)過程中污染雜菌。

　　f.完全凝固再翻轉(zhuǎn)平板放塑料筐內(nèi)，4℃?zhèn)溆谩?/p>

　　分析與討論

　�。�1）如何證明培養(yǎng)基滅菌是否徹底?

　　把滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)的不同位置，每處抽取數(shù)管(瓶)，標(biāo)上記號，置25℃～30℃培養(yǎng)一周左右進(jìn)行檢查。如果培養(yǎng)基沒有什么變化，說明滅菌效果良好；如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導(dǎo)致蒸汽不暢，或鍋的結(jié)構(gòu)不合理等原因所致，應(yīng)根據(jù)上述情況進(jìn)行改進(jìn)；如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌，說明滅菌溫度或滅菌時間不夠，應(yīng)提高壓力或延長滅菌時間。經(jīng)過幾次檢驗(yàn)都證明能徹底滅菌后，以后按同樣條件滅菌的則不必進(jìn)行檢查。

　　經(jīng)過幾次檢驗(yàn)都證明能徹底滅菌后,以后按同樣條件滅菌的則不必進(jìn)行檢查。

　　（2）為什么說消毒與滅菌是微生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)必不可少的基本知識?由于病原生物廣泛存在于自然界，可通過不同途徑和媒介進(jìn)入人體，引起感染或造成疾病流行。因此，殺滅或清除存在于體外傳播媒介上的病原生物，對于切斷傳播途徑、預(yù)防和控制其感染具有重要意義。自古以來，人們就利用煮沸、火燒、日曬等方法殺滅或去除微生物，達(dá)到預(yù)防疾病的目的。實(shí)際上，除了在臨床醫(yī)療實(shí)踐中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、食物保存、飲水凈化、藥品與生物制品生產(chǎn)等過程中都需要避免微生物的污染。

　　實(shí)驗(yàn)二霉菌的接種與培養(yǎng)

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：掌握霉菌與酵母菌的接種與培養(yǎng)方法。

　　實(shí)驗(yàn)原理：

　　接種是微生物實(shí)驗(yàn)及科學(xué)研究中一項(xiàng)基本操作技術(shù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵�求�?/p>

　　選擇合適的接種工具與接種方法，接種工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種鉤、吸管、滴管、棉簽等。常用接種方法有：斜面接種，液體接種，穿刺接種，平板接種和固體接種。接種的關(guān)鍵是無菌操作。

　　無菌操作的原則：在酒精燈火焰旁進(jìn)行，所有器皿均須嚴(yán)格消毒，培養(yǎng)基應(yīng)事先做無菌試驗(yàn)，

　　接種工具使用前后須經(jīng)火焰燒灼滅菌，棉塞不能亂放，始終夾在手指中。在培養(yǎng)四大類微生物時應(yīng)注意選擇適宜的培養(yǎng)條件。多數(shù)細(xì)菌為專性需氧菌與兼性需氧菌，少數(shù)為厭氧菌。多數(shù)食品腐敗菌和工業(yè)用菌種，以及人和動物病原菌的最適生長溫度為37℃，并且在近中性（PH6.5～7.5）條件下生長良好。多數(shù)放線菌為好氧菌，少數(shù)為厭氧菌，最適生長溫度為28～30℃，多數(shù)適宜在偏堿性環(huán)境中生長（PH7.5～8.5）。

　　實(shí)驗(yàn)材料與方法

　�。�1）實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)設(shè)備：溫箱。

　　實(shí)驗(yàn)器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假絲酵母、新生隱球酵母菌、細(xì)黃鏈霉菌、PDA平板、高鹽察氏平板、高氏合成I號平板、塑料筐、20%甘油水溶液、鑷子、接種鏟、無菌蓋玻片、無菌濾紙、無菌載玻片、石棉網(wǎng)、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐等。

　�。�2）實(shí)驗(yàn)方法：平板接種：毛霉→PDA平板（點(diǎn)植法）

　　啤酒酵母→PDA平板（五區(qū)分離劃線法）青霉、曲霉→PDA平板（連續(xù)劃線法）

　　小室載玻片培養(yǎng)法：

　　1、取滅菌后小室平皿。

　　2、取無菌PDA瓊脂薄層平板，用鑷子夾住蓋玻片切割成0.5～1.0cm2的瓊脂塊，并將其移至培養(yǎng)小室中的載玻片上，制作過程注意無菌。

　　3、用接種環(huán)取少量霉菌的.孢子接種于培養(yǎng)基四周，用無菌鑷子

　　將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上，并(轉(zhuǎn)載于:l滅菌的20%甘油（用于保持濕度），蓋上皿蓋，標(biāo)記，置28～30℃培養(yǎng)3～5d

　　糧食產(chǎn)品的平板接種：

　　1.取糧食樣品20g,放入無菌燒杯，加無菌水洗滌，

　　反復(fù)10次，棄去水后，將糧粒倒于平皿內(nèi)備用2.鑷子取糧食種入PDA瓊脂內(nèi)，每皿可接種5-10粒。

　　放線菌的接種：取細(xì)黃鏈霉菌劃線法接種，在接種的劃線處，無

　　菌操作斜插入蓋玻片數(shù)張。

　　注意事項(xiàng)：

　　1.空氣環(huán)境無菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)）

　　2.在酒精燈火焰處，傾斜打開瓶口。

　　3.接種環(huán)使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。

　　4.接種環(huán)使用后，先在火焰周圍把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。5.金屬桿快速通過火焰2－3次，殺滅表面微生物

　　分析與討論

　　1、糧食中產(chǎn)毒真菌的種類及產(chǎn)生毒素？

　　青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、細(xì)黃鏈霉菌（放線菌）青霉素、絲生毛霉素、黃曲霉素、根霉素、白念菌素。細(xì)黃鏈菌素

　　2、常用霉菌培養(yǎng)基有哪些？

　　馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基

　　豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）瓊脂培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基

　　3、霉菌的接種方法有何不同？為什么？

　�。�1）連續(xù)劃線法（青霉、曲霉）

　　青霉與曲霉為局限性生長的霉菌。應(yīng)采用連續(xù)劃線接種法接種。（2）點(diǎn)植法（根霉、毛霉）

　　根霉與毛霉生長區(qū)域比較大，應(yīng)采用點(diǎn)植法。（3）小室載玻片培養(yǎng)法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）

　　實(shí)驗(yàn)三霉菌的制片與形態(tài)觀察

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；

　　了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。了解放線菌的基本形態(tài)特征。

　　實(shí)驗(yàn)原理：霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多（約為3-10μm）,常是細(xì)

　　菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。霉菌菌絲較粗大，細(xì)胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以制標(biāo)本時常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，用此染液做霉菌制片的特點(diǎn)是細(xì)胞不變形，具有殺菌、防腐作用，不易干燥，能保持較長時間，能防止孢子四處飛散，棉蘭具有一定的染色作用，染液的藍(lán)色能增大反差。

　　實(shí)驗(yàn)材料：

　�。ㄒ唬┚�種：在馬鈴薯瓊脂平板上培養(yǎng)3—4天的青霉(Penicilliumsp.)、曲霉(Aspergillussp.)、毛霉（Mucorsp.）、根霉；

　�。ǘ�）器材及用具：鑷子、載玻片、蓋玻片、顯微鏡。

　　實(shí)驗(yàn)方法：

　�。ㄒ唬┲苯又破�觀察

　　于潔凈載玻片上，用鑷子取霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲，然后小心地蓋上蓋玻

　　片。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡（二）小室培養(yǎng)觀察

　　將載玻片直接放低倍鏡下觀察，再換高倍鏡觀察。

　　觀察原則：

　　毛霉：用低倍鏡觀察孢子囊梗、囊軸等。用高倍鏡觀察孢子囊孢子的形

　　狀、大小。

　　根霉：菌絲、孢子同毛霉，注意觀察有無假根。

　　曲霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無隔膜，分生孢子著生位置，辨認(rèn)分生孢

　　子梗、頂囊、小梗和分生孢子。

　　青霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生

　　孢子的形狀等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

　　分析與討論：

　　青霉和曲霉的形態(tài)有哪些異同？

　　青霉常分布在霉腐變質(zhì)的水果、蔬菜、糧食和皮革等物體上，菌體直立菌絲的頂端長有掃帚狀的結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)的每一個分枝上，生有成串的孢子，成熟的孢子呈青綠色，進(jìn)行孢子生殖。

　　曲霉廣泛分布在谷物、空氣和土壤中，曲霉直立菌絲的頂端膨大成球狀，球狀結(jié)構(gòu)的表面放射狀地生有成串的孢子，孢子隨曲霉種類的不同而呈黃色、橙色或黑色。

　　從皮膚取材查真菌如何檢查？

微生物實(shí)驗(yàn)報告5